載玻片紗布擦干，涂菌部位火焰除油。

把菌液涂抹在載玻片上，接種環要在火焰中滅菌。

讓涂片自然干燥。

菌膜朝上，用火焰固定2-3次。

把固定過的圖片放報紙上，加草酸銨結晶液，染色1分鐘。

用水緩慢沖洗載玻片上的染色液，吸水紙吸干。

加一滴碘液，染色1分鐘，水洗。

吸殘留水，加95%乙醇脫色半分鐘，流出液體無紫色后，立即<愛尬聊_百科>水洗。

加蕃紅染色四分鐘，水洗。革蘭氏染色完成，觀察即可。

革蘭氏陽性菌為藍紫色，陰性菌為紅色。