風(fēng)雨孫策 2021-07-31 19:26

SELEX技術(shù)是指從隨機(jī)寡核苷酸文庫中篩選出對(duì)給定靶分子具高親和力的寡聚物,從而推論出那些對(duì)DNA或RNA結(jié)合蛋白具有很高親和力的配體。這些經(jīng)SELEX篩選出的高親和序列可應(yīng)用于多項(xiàng)研究以及疾病的診斷和治療等。用于篩選轉(zhuǎn)錄因子DNA結(jié)合序列時(shí),該技術(shù)的基本步驟為：先體外化學(xué)合成一個(gè)兩端帶有PCR引物復(fù)性位點(diǎn),中間含有待篩選隨機(jī)序列的單鏈寡核苷酸文庫,通過單引物復(fù)性及聚合酶延伸,形成雙鏈DNA文庫,再將文庫與轉(zhuǎn)錄因子蛋白混合,形成“DNA/蛋白質(zhì)”復(fù)合物,分離出復(fù)合物中的DNA,并以其為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增,進(jìn)行下一輪篩選過程;通過重復(fù)的篩選與擴(kuò)增,最后得到高親和力和高特異性的DNA分子。該過程中,最關(guān)鍵一步就是如何將“DNA/蛋白質(zhì)”復(fù)合物從游離DNA中分離出來,經(jīng)典的篩選技術(shù)有凝膠阻滯法、親和層析法等。

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