如何檢<愛尬聊_健康養生>測引物的純度？

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音樂之光2018 2021-08-22 03:22

實驗室方便的做法是用PAGE方法。使用加有7M尿素的16%的聚丙烯酰胺凝膠進行電泳。取0.2-0.5OD的引物，用尿素飽和液溶解或引物溶液中加入尿素干粉直到飽和，上樣前加熱變性(95℃,2mins)。加入尿素的目的一是變性，二是增加樣品比重，容易加樣。600V電壓進行電泳，一定時間后(約2-3小時)，剝膠，用熒光TLC板在紫外燈下檢測帶型，在主帶之下沒有雜帶，說明純度是好的。如果條件許可，也可以用銀染方式染色。

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始終還是遺憾 2021-08-22 03:27

這個可以直接觀察核酸的整條曲線，那比光靠260,280兩個吸收值，肯定要準確很多?？梢耘芤幌颅傊悄z電泳，如果上下游引物亮度差很多，則可能是引物有問題。

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_WeCh****78463 2021-08-22 03:38

除了常見的PAGE還有以下方法：
高效液相色譜 (HPLC)
以離子交換樹脂為填充料，可以非常有效的檢測出N-1或N-2短片段。
毛細管凝膠電泳(CGE)
基于尺寸排阻機理，可實現單核苷酸分離，可用于測定寡核苷酸純度，分辨率高，定量準確。
質譜分析 (MS)
MS是用電場和磁場將運動的離子按它們的質荷比分離后進行檢測的方法。

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